J9九游国际医药依托拥有实验动物使用许可证的实验动物中心进行合作，为您提供主要包括模型制备、受试物给药、标本采集、功能指标检测等技术服务。

服务目录号：#OGF-003

服务项目：辅助改善记忆功能评价

服务内容：

1.跳台实验、避暗实验、穿梭箱实验（双向回避实验）、水迷宫实验（任选其一）

2.选用雄近交系小鼠，断乳鼠或成年鼠（18－22g），用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠，雌雄均可，单一性别，每组10－15 只。

3.实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10 倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30 天，必要时可延长至45天。

4.结果判定：跳台实验、避暗实验、穿梭箱实验、水迷宫实验四项实验中任二项实验结果阳性。且重复实验结果一致（所重复的同一项实验两次结果均为阳性），可以判定该受试样品辅助改善记忆动物实验结果阳性。

客户提供：受试样品、阳性对照品

J9九游国际提交：详细研究报告

服务周期：3个月

服务目录号：#OGF-003-1

模型名称：跳台实验

原理：反应箱底铺有通36v 电的铜栅，动物受到电击，其正常反应是跳上箱内绝缘的平台以避免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台，如此训练5min，并记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。24h 或 48h 重作测验，此即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和3min 内的错误总数。停止训练 5 天后（也可以在训练后的一周、两周或其它时间点）进行记忆消退实验。

受试样品对正常小鼠记忆的影响：末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。将动物放入反应箱内（台上、台下）适应环境 3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以36v 的交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台（绝缘体），以躲避伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台上。训练一次后，将动物放在反应箱内的平台上，记录5min 内各鼠跳下平台的错误次数和第一次跳下平台的潜伏期，以此作为学习成绩。24 或 48h 后进行重测验，将小鼠放在平台上，记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、各鼠 3min 内电击次数和受电击的动物数总数，同时计算出现错误反应的动物的百分率（受电击的动物数占该组动物总数的百分率）。停止训练5 天后（包括第 5 天）可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验（方法同重测验）。

受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响：

造模：记忆获得障碍模型制造：训练前10min 腹腔注射樟柳碱或东莨菪碱 5mg/kg BW；

记忆巩固障碍模型制造：训练前10min 腹腔注射环已酰亚胺 120mg/kg BW；

记忆再现障碍模型制造：重测验前30min 灌胃 30%的乙醇 10mL/kg BW。

数据处理及结果判定：潜伏期结果为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F 值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

错误次数和3min 内跳下平台的动物数均为记数资料，可用c²检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40 但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。

若受试样品组与对照组比较，潜伏期明显延长，错误次数或跳下平台的动物数明显少于对照组，差异有显著性，以上三项指标中，任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。

服务目录号：#OGF-003-2

模型名称：避暗法实验

原理：利用小鼠嗜暗的习性设计一个装置，一半是暗室，一半是明室，中间有一小洞相连。暗室底部铺有通电的铜栅，并与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。小鼠进入暗室即受到电击，计时自动停止。

仪器和试剂：避暗仪：该装置分明暗两室。明室大小为12cm×4.5cm，其上方约 20cm 处悬一 40w 钨灯丝。暗室较大，大小为17cm×4.5cm，两室之间有一直径约 3cm 的圆洞。两室底部均铺以铜栅。暗室底部中间位置的铜栅可以通电，电击强度可在一旋钮上任意选择。一般采用40v 电压。暗室与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。

试剂：樟柳碱、东莨菪碱、环己酰亚胺、乙醇。

受试样品对正常小鼠记忆的影响：末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器。动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时器自动停止，取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间，此即潜伏期，训练5min，并记录 5min 内电击次数。24h 或 48h 后重作测验，记录每只动物进入暗室的潜伏期和5min 内的电击次数，并计算 5min 内进入暗室（错误反应）的动物百分率。停止训练 5 天后可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验。

数据处理及结果判定：潜伏期时间为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F 值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。5min 内进入暗室的次数和 5min 内进入暗室的动物数均为计数资料，可用c2检验，四格表总例数小于 40，或总例数等于或大于40 但出现理论数等于或小于 1 时，应改用确切概率法。若受试样品组小鼠进入暗室的潜伏期明显长于对照组，5min 内进入暗室的错误次数或 5min 内进入暗室的动物数少于对照组，且差异有显著性，以上三项指标中任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。

服务目录号：#OGF-003-3

模型名称：穿梭箱实验（双向回避实验）

仪器与试剂：仪器：大鼠穿梭箱。该装置由实验箱和自动记录打印装置组成。实验箱大小为50cm×16cm×18cm。箱底部格栅为可以通电的不锈钢棒，箱底中央部有一高1.2cm 挡板，将箱底部分隔成左右两侧。实验箱顶部有光源和蜂鸣音控制器，自动记录打印装置可连续自动记录动物对电刺激（灯光或/和蜂鸣器）的反应和潜伏期，并将结果打印出来。

试剂：樟柳碱，东莨菪碱，环已酰亚胺，乙醇

受试样品对正常大鼠条件反射建立的影响：末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。将大鼠放入箱内任何一侧，20s 后开始呈现灯光或蜂鸣音，持续20s，后 10s 内同时给以电刺激（100V，0.2mA，50Hz，AC）。大鼠在遭电击后即逃避，必须跑到对侧顶端，挡住光电管后才可中断电击，此为被动回避反应，在每次电击前给予条件刺激，反复强化后，大鼠在接受条件刺激后即跳向对侧并挡住光电管而逃避电击，此为主动回避反应，每隔天训练一回，每回50次，连续训练4－5 回后，动物的主动回避反应率可达 80－90%以上。根据打印结果分析如下指标：动物反应次数，动物主动回避时间，动物被动回避时间，动物主动回避率。停止训练5－50 天内，分 2－3 次测定其记忆消退情况。

数据处理及结果判定：动物主动回避时间和被动回避时间为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F 值，F 值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。若实验组主动和/或被动回避时间明显短于对照组，差异有显著性，可判定为该指标阳性。

服务目录号：#OGF-003-3

模型名称：水迷宫实验

原理：动物都有一种“探索”和“更替”倾向，当离开一个臂时，总是跑向“久”未跑过的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而寻找能爬出水面的阶梯，训练后，小鼠能记住找到阶梯的路线。

仪器与试剂：水迷宫自动记录仪。该仪器是由迷宫游泳箱和自动记录仪两部分组成。迷宫游泳箱由聚乙烯塑料制成，长100cm、宽 100cm、高 30cm；内径长 90cm、宽 90cm、高 30cm，泳道宽 12cm，泳道走向固定。见附图。

受试样品对正常小鼠记忆的影响：连续给样30 天，末次给样次日开始训练。训练期间继续给样，每天一次。迷宫泳道水深 9cm，水温约20℃（≮15℃）。将小鼠训练时间限定为 2min，在 2min 内未到达终点的小鼠均记为 2min。第一次训练前将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上3 次。以后每次训练前将小鼠放在梯子附近，背朝楼梯，使其自动爬上1 次。实验分阶段进行，视动物学习成绩逐步加长路程。第一次训练时用一挡板在 A 处档死，从A 处开始训练，记录从 A 点到达终点的时间。第二次训练加长路程，从 B 处开始，此路程约训练 3

次，至动物数80%以上在 2min 内达到终点后再延长路程，分别记录各鼠每次从 B 点到达终点所需的时间和发生错误的次数（进入任何一个盲端一次均算一次错误）。末次测试从起点进行，将小鼠放在起点，记录从起点到达终点所需的时间和发生错误的次数。每次训练时，对2min 内未达到终点的小鼠，应引导其到达终点，从终点的楼梯上来，达到训练的目的。每次训练或测验时均将头朝起始点。最后计算各组动物5 次训练和测试的总错误次数，到达终点的总时间及2min 内到达终点的总动物数（百分率），停止训练 5 天后可在不同的时间从起点进行消退实验。

数据处理及结果判定：到达终点的时间属计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F 值，F 值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。错误次数和到达终点的动物数（百分率）两指标为计数资料，可用χ²检验，四格表总例数小于40，或总

例数等于或大于40 但出现理论数等于或小于 1 时，应改用确切概率法。试验组与对照组比，试验组到达终点所用的时间或到达终点前的错误次数明显少于对照组，或2min 内到达终点的动物数明显多于对照组，且经统计学检验差异有显著性。其中任一项指标为阳性，可判为该项实验阳性。